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                  硅胶色谱柱再生的方法是什么?

                  发布时间:2021-11-16      点击次数:472
                     1.硅胶色谱柱的平衡
                      硅胶色谱柱由工厂测试后是保存在水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇冲洗硅胶色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和水互溶。每天用足够的时间以流动相来平衡硅胶色谱柱,您就会在处理问题方面获得的"补偿",而且您的硅胶色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤:
                    a.平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡硅胶色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡)
                    b.如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡;分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟?;ぶ?。
                    2.硅胶色谱柱的再生
                    长期使用的硅胶色谱柱,往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)??梢远怨杞荷字性偕?,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。
                    建议用来冲洗柱子的溶剂体积
                    硅胶色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积
                    125-4mm1.6ml30ml
                    250-4mm3.2ml60ml
                    250-10mm20ml400ml
                    选择再生方法:
                    极性固定相(如Si,NH2*,DIOL基色谱填料)的再生:
                    正庚烷→→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
                    非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的再生:水→乙腈→(或异丙醇)→乙腈→水
                    注意:
                    a.在对NH2改性的硅胶色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出稀硫酸可以用来清洗已污染的硅胶色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。
                    3.硅胶色谱柱的维护
                    a.使用预柱?;し治鲋ü杞涸诩粤鞫?离子性流动相中有一定的溶解度)
                    b.大多数反相硅胶色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该硅胶色谱柱的pH范围
                    c.避免流动相组成及极性的剧烈变化
                    d.流动相使用前必须经脱气和过滤处理
                    e.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中
                    f.氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀

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